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过氯化氢酶定性实验过程及操作方法--氯化氢
1．取4支干净的试管，按a b c对照编号。放在试管架上备用。氯化氢
2．在A B C试管内分别加入 5ml、10ml、15ml的活性污泥混合液，再在A和B试管中分别加10 ml和5 ml蒸馏水。在对照管内加15 ml蒸馏水。
3．在A B C 及对照管中分别加入O．2％的淀粉液若干滴(淀粉液的用量，在做预备实验时根据样品中淀粉酶含量多少而定)，迅速摇匀并记下反应的初始时间。
4．在上述4个管内分别加若干滴碘液(碘液用量在预备实验时酌定)，迅速摇匀，这时各管均呈蓝色。
5．观察结果。注意各管的变化，记下各管蓝色完全消失时的时间(即淀粉酶和淀粉反应完全的时间)，并对结果进行分析。
(二)细菌淀粉酶在固体培养基中的扩散实验
1．将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45℃左右倒人无菌培养皿内(每皿约10 ml)，共倒3个，静置待冷凝即成平板。
2．在无菌操作条件下，用接种环分别挑取枯草杆菌、大肠杆菌和活性污泥各一环分别在3个平板上点种5个点。倒置于37℃恒温箱内培养24～48 h。
3．观察结果，取出平板，分别在3个平板内菌落周围滴加碘液，观察菌落周围颜色的变化。若在菌落周围有一个无色的透明圈，说明该细菌产生淀粉酶并扩散到基质中去。若菌落周围仍为蓝色，说明该细菌不产生淀粉酶。
(三)氯化氢酶的定性测定
1．将配备的枯草杆菌和大肠杆菌斜面各1支放在试管架上。
2．用滴管吸取过氧化氢滴加入两管菌种斜面上，有气泡产生的为接触酶阳性(有过氧化氢酶)；无气泡产生的为接触酶阴性(无过氯化氢酶)。 |
